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P-糖タンパク質アトパーゼ活性に対する界面活性剤の影響: 基礎活性とベラパミル依存性活性の変動の違い。

多剤耐性表現型に関連する細胞膜糖タンパク質である P 糖タンパク質 (P-gp) は、さまざまな両親媒性薬物の ATP 依存性流出の原因となります。多剤耐性細胞株 DC-3F/ADX から調製した膜小胞を使用して、非可溶化時のさまざまな界面活性剤によって誘発される基底 (つまり薬物の非存在下) およびベラパミル依存性 P-gp ATPase 活性の摂動を研究しました。可溶化濃度でも同様です。界面活性剤濃度の増加に伴う膜の可溶化の進行は、光散乱実験と遠心分離実験によって監視されました。非可溶化界面活性剤の濃度については、DOC を除くすべての試験した界面活性剤は P-gp ATPase 活性の部分的な阻害を誘導しましたが、これは膜に取り込まれたさまざまな試験した界面活性剤の量と相関していませんでした。ベラパミルによって誘導される P-gp 活性化の分析により、P-gp ATPase 活性が非可溶化濃度のさまざまな界面活性剤によって異なって調節されることが明らかになりました。したがって、P-gp と界面活性剤の間の特異的な相互作用は、全体的な膜の混乱よりも発生する可能性が高くなります。試験したさまざまな界面活性剤による可溶化後、基礎的な P-gp ATPase 活性は、天然の膜で測定されたものと同等のレベルでこの活性を維持することができた CHAPS の存在下を除いて、事実上完全に阻害されました。しかし、ベラパミル誘導性の P-gp ATPase 活性化は、CHAPS による P-gp 可溶化中に失われますが、CHAPS を臨界ミセル濃度以下に希釈すると回復しました。これらの観察は、混合ミセル内の P-gp 分子と CHAPS 分子間の特異的な相互作用を示しています。全体として、P-gp/界面活性剤の特異的相互作用を証明する我々のデータは、P-gp膜貫通ドメイン上の薬物輸送部位の位置と一致している。