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コリシン E1 チャネル ドメインの膜トポロジーは、蛍光共鳴エネルギー移動 (FRET) によって研究されました。FRETには、ドナーとして遺伝的にコードされた蛍光アミノ酸（クマリン）が含まれ、FRETアクセプターとしてDABMI（4-（ジメチルアミノ）フェニルアゾフェニル-4'-マレイミド）と結合した選択的に標識されたシステイン残基が含まれます。蛍光クマリン残基は、コリシン チャネル ドメイン内の任意の部位への選択的な組み込みを可能にする直交 tRNA/アミノアシル tRNA シンテターゼ ペアを介してタンパク質に組み込まれました。各変異体には、クマリン取り込みのための停止 (TAG) 変異と、DABMI 結合のためのシステイン (TGT) 変異がありました。可溶性状態と膜結合状態の両方について FRET 分析を使用して、ヘリックス 1 ～ 6 内の 6 つのヘリックス間距離を決定しました。FRET データは、膜結合時のヘリックス 3 ～ 6 間のヘリックス間距離の大きな変化を示し、チャネル ドメインの膜結合構造についての新たな洞察を提供しました。一般に、クマリン-DABMI FRETヘリックス間効率は膜結合時に減少し、コリシンチャネルの包括的モデルに基づいて構築されました。チャネルドメインの閉鎖状態の暫定モデルは、現在および以前に公開された FRET データに基づいて開発されました。このモデルは、ヘリックス 1 ～ 7 が細胞外側から時計回り方向に円形に配置され、ヘリックス 8 と 9 によって形成される中央の膜貫通ヘアピンの周囲でヘリックス 1、6、7、および 10 が膜界面で会合していることを示唆しています。