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他のプラス鎖 RNA ウイルスと同様に、トンバスウイルスは膜結合ウイルス レプリカーゼ複合体 (VRC) によって複製されます。VRC は、p92 ウイルスにコードされた RNA 依存性 RNA ポリメラーゼ (RdRp)、ウイルス p33 RNA シャペロン、および取り込まれたいくつかの宿主タンパク質から構成されます。翻訳後に機能的な RdRp になるためには、p92 複製タンパク質が VRC に組み込まれ、その後活性化される必要があります。我々は以前、無細胞酵母抽出物ベースのアッセイで、トマトブッシュスタントウイルス（TBSV）RdRpの活性化には可溶性宿主因子が必要であることを示しました。この記事では、N 末端が切断された組換え TBSV RdRp の活性化に必要な宿主因子として、細胞性熱ショックタンパク質 70 (Hsp70) を同定しました。さらに、小分子に基づく Hsp70 機能の遮断は、インビトロでのトンバスウイルス RdRp による RNA 合成を阻害します。さらに、中性リン脂質、すなわちホスファチジルエタノールアミン (PE) およびホスファチジルコリン (PC) が in vitro で RdRp 活性化を増強することを示します。対照的に、ホスファチジルグリセロール (PG) は、in vitro RdRp 活性化に対して強力かつ優勢な阻害効果を示します。また、PE と PC は RdRp とウイルスのプラス鎖 RNA [(+)RNA] 相互作用を刺激するのに対し、PG はウイルス RNA の RdRp への結合を阻害することも示します。トンバスウイルスの RdRp 活性化におけるさまざまなリン脂質の刺激的役割と阻害的役割に基づいて、我々は、標的とされた細胞内膜の脂質組成が、感染過程で新たな VRC 構築を調節するためにトンバスウイルスによって利用される可能性があることを提案します。ウイルスにコードされた RNA 依存性 RNA ポリメラーゼ(RdRp) は、いくつかのプラス鎖 RNA ウイルスの感染細胞内でウイルス RNA 子孫を合成する役割を担っていますが、最初は不活性です。この戦略は、RNA 誘発細胞抗ウイルス応答の急速な誘導につながるサイトゾルでのウイルス RNA 合成を回避する可能性があります。膜結合レプリカーゼ複合体の構築中に、ウイルスの RdRp は、RdRp が RNA 合成できるようにする不完全には理解されているプロセスを通じて活性化されます。TBSV RdRp を使用することにより、我々は、取り込まれた細胞の Hsp70 シャペロンと中性リン脂質が in vitro で RdRp の活性化を促進することを示します。対照的に、ホスファチジルグリセロール（PG）は、in vitro RdRp 活性化および RdRp とウイルス RNA 相互作用に対して支配的な阻害効果を有しており、RdRp を取り囲む膜状ミクロドメインがその RNA 合成能力に大きな影響を与えていることが示唆されています。したがって、ウイルス RdRp の活性化は、感染細胞内の複数の宿主成分に依存している可能性があります。