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5-フルオロウラシル (5-FU) のいくつかの代謝産物と 2 つの内在性一リン酸ヌクレオチドを特異的に定量するために、液体クロマトグラフィー - タンデム質量分析 (LC-MS/MS) に基づく独自の方法を開発しました。このアッセイにより、以下の測定が可能になりました: (i) 5-FU または 5-フルオロ-2'-デオキシウリジン (5-FdUrd) からの 5-フルオロ-2'-デオキシウリジン-5'-一リン酸 (5-FdUMP) の細胞内生成(ii) 細胞内 2'-デオキシウリジン-5'-一リン酸 (dUMP)/チミジン-5'-一リン酸 (TMP) 比に対する 5-FdUMP 濃度の影響、および (iii) 5-FdUMP およびABC トランスポーターによるヒト培養細胞からの 5-FU。我々の実験条件下では、細胞を5-FUまたは5-FUrdとともにインキュベートしました。次に、細胞タンパク質をメタノールで沈殿させました。この手順により、高い抽出回収率が得られました。さらに、細胞からの 5-FU および 5-FdUMP 分泌を測定するために、培地中のこれらの分子の定量を実行しました。培地を直接注入するか (5-FU)、Oasis Wax 抽出カートリッジ (5-FdUMP) を使用して固相抽出を行いました。分析物の分離は、移動相としてギ酸アンモニウム緩衝液/メタノール/水 (5/5/90、v/v) を使用するアイソクラティック モードの dC18 Atlantis 3.5 μm (100 mm × 2.1 mm id) カラムで実行されました。実行時間は 6.2 分を超えませんでした。検体は、マイナスイオンモード下のエレクトロスプレーインターフェースでイオン化されました。化合物に応じて 2.5 ～ 150 ng mL -1 の範囲でメソッドを検証しました。アッセイ内およびアッセイ間の変動は 7 日間で 10% 未満でした。サンプルを -20 °C で少なくとも 2 週間保存し、3 回の凍結融解サイクルを行った後でも、すべての化合物は細胞内または培地中で安定でした。どちらの培地でもマトリックス効果は観察されませんでした。