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D-(+)-セロビオースは、炭水化物の発酵能力に基づいて細菌を区別するために使用されます。β-グルコシダーゼの基質です。化学原料や食品用、甘味の少ない砂糖としても利用されています。

主にアゾ染料中間体として使用されます。農薬や動物用医薬品の中間体としても使用できます。

産業では、ニクロサミド、カルバコール、ニトロソアミン、キノリン尿素塩などの製造に使用できます。また、p-フェニレンジアミン、酸化防止剤、防腐剤の製造にも使用できます。