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1. アデノシン二リン酸 (ADP) 由来のアデノシンが、特に P2Y12 受容体における ADP の効果が妨げられる P2Y12 アンタゴニストの存在下で、血小板凝集を阻害するかどうかを調査する。血小板凝集は、トロンビン受容体活性化因子に応答して測定された。 ADP および P2Y12 アンタゴニストであるカングレロール、プラスグレル活性代謝物、およびチカグレロールの存在下で、多血小板血漿 (PRP) および全血中の血小板計数によるペプチド。P2Y12アンタゴニストの存在下では、PRPとADPのプレインキュベーションは凝集を阻害した。この効果はアデノシンデアミナーゼによって無効になりました。赤血球へのアデノシンの取り込みを阻害するためにジピリダモールを添加した場合を除いて、全血では凝集の阻害は起こらなかった。PRP および全血における ADP の効果は、アデノシンを使用して再現され、cAMP の変化に直接関連していました (血管拡張剤刺激によるリンタンパク質のリン酸化によって評価)。使用した P2Y12 アンタゴニストに関係なく、すべての結果は同じでした。ADP は、アデノシンへの変換を通じて P2Y12 アンタゴニストの存在下で血小板凝集を阻害します。阻害は PRP で起こりますが、アデノシンの取り込みが阻害される場合を除いて全血では起こりません。研究された P2Y12 アンタゴニストのどれも、行われた実験ではジピリダモールの効果を再現しませんでした。

2.ADP は、生理学的濃度の細胞外 Ca(2+) [(Ca(2+) )(o) ] で in vitro で誘導される凝集反応が限られているため、弱い血小板アゴニストと考えられています。[Ca(2+) ](o) を低下させると、逆説的に ADP によって引き起こされる凝集が強化され、この効果はトロンボキサン A(2) 生成の強化に起因すると考えられています。この研究では、血小板活性化の [Ca(2+) ](o) 依存性におけるエクトヌクレオチダーゼの役割を調べました。[Ca(2+) ](o) をミリモルからマイクロモルレベルに減少させると、多血小板血漿と洗浄懸濁液の両方において、ADP (10 μmol/l) によって引き起こされる血小板凝集が一時的な応答から持続的な応答に変換されました。アスピリンによるトロンボキサン A(2) 生成のブロックは、この [Ca(2+) ](o) - 依存性に影響を与えませんでした。ADP 分解の防止により、低 [Ca(2+) ](o) と生理学的 [Ca(2+) ](o) の差がなくなり、両方の条件で堅牢かつ持続的な凝集が生じました。細胞外 ADP の測定により、ミリモル濃度の [Ca(2+) ](o) と比較して、マイクロモル濃度では血漿およびアピラーゼ含有生理食塩水の両方で分解が減少していることが明らかになりました。以前に報告されたように、トロンボキサン A(2) 生成は低 [Ca(2+) ](o) で増強されましたが、これはエクトヌクレオチダーゼ活性とは無関係でした。P2Y 受容体拮抗薬カングレロールと MRS2179 は P2Y(12) 受容体の必要性を示しました持続的な ADP 誘発凝集に役立ちますが、P2Y(1) の役割は小さいです。結論として、Ca(2+) 依存性エクトヌクレオチダーゼ活性は、ADP への血小板凝集の程度を決定する主要な要因であり、P2Y 受容体活性化の研究では制御する必要があります。