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ヒトの腸内共生生物における Ca2+ 依存性のα-マンノシダーゼファミリーの機構に関する洞察。

バクテロイデス シータイオタオミクロンに代表される結腸細菌は、グリコシド加水分解酵素 (GH) の大きなファミリーを利用して食物性多糖類と宿主のグリカンを栄養素として利用することにより、人間の健康を維持する上で重要な役割を果たしています。このようなＧＨファミリーの拡大は、Ｂ．シータイオタオーミクロンゲノムによってコードされる２３ファミリーのＧＨ９２グリコシダーゼによって例示される。今回我々は、これらが単一の置換機構を介して作用して宿主のN-グリカンを利用するα-マンノシダーゼであることを示す。2 つの GH92 マンノシダーゼの三次元構造は、触媒中心がドメイン界面に位置する 2 ドメイン タンパク質のファミリーを定義し、Ca(2+)-依存的なやり方。阻害剤と複合体を形成した GH92 の三次元構造は、触媒作用の特異性、機構、および立体構造の経路についての洞察を提供します。Ca(2+) は、マンノシドをその基底状態 (4)C(1) 椅子型構造から遷移状態に向かって変形させるのを助ける重要な触媒的役割を果たします。化学。バイオル。6, 125-32, (2010）

コンカナバリン A-セファロースカラムを用いたオボアルブミン グリコアスパラギンのフロンタル アフィニティー クロマトグラフィー。レクチンの結合特異性の定量的研究。

セファロース 4B に固定化されたコンカナバリン A (ConA) とオボアルブミン由来の 10 種類のグリコアスパラギンとの相互作用を、フロンタル アフィニティー クロマトグラフィーによって定量的に調べました。この方法では、炭水化物溶液を ConA-Sepharose カラムに連続的に適用し、溶出フロントの遅延を相互作用の強さのパラメーターとして測定します。ConA を含む各糖の解離定数 (Kd) を決定できます。p-ニトロフェニル-α,D-マンノシドの結合の分析により、ConA の結合特性はセファロース 4B への固定化後に本質的に変化しないことが示されました。各オボアルブミングリコアスパラギンを還元メチル化法によりトリチウム標識して分析した。得られた Kd 値を比較すると、グリコシル鎖のごくわずかな構造の違いによって ConA の結合が大きく変化することがわかりました。この結果は、ConA が特定のグリコシル鎖構造 Man α 1-6(Man alpha 1-3)Man を認識し、C-6 結合マンノースの C-3 位の少なくとも 1 つのヒドロキシル基が遊離していることを示唆しています。